摘要：由于覆盆子基礎(chǔ)研究薄弱，2010年版《中國藥典(一部)》中僅有性狀鑒別和顯微鑒別。目前已有椴樹苷的HPLC含測方法報(bào)道，但尚無覆盆子中的金絲桃苷定量測定的文獻(xiàn)。本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法對其進(jìn)行了含量測定，結(jié)果表明，該方法快速簡捷、重現(xiàn)性好，取得了滿意的結(jié)果。

　　1 實(shí)驗(yàn)部分

　　1.1 儀器與試藥

　　HP-Agilent1100型高效液相色譜儀，包括G1322A真空脫氣機(jī)，G1311A四元泵，G1313A自動(dòng)進(jìn)樣器，G1365A多波長檢測器，LGC-1025M柱溫箱，HP Rev.A.07.01色譜工作站;BP211D型1/10萬電子分析天平(德國Sartorius公司);250超聲波清洗器(上海)。

　　金絲桃苷對照品(供含測用，中國藥品生物制品檢定所提供，批號：111521-200303)。乙腈(色譜純，美國Tedia公司)，水為重蒸水，其余試劑均為分析純。

　　覆盆子Rubi Fructus，經(jīng)鑒定為薔薇科植物華東覆盆子Rubus chingii Hu的干燥果實(shí)。

　　1.2 方法與結(jié)果

　　1.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性考察

　　色譜柱：SinoChrom ODS BP(5μm，4.6×250mm);流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸溶液(15:85);流速：1mL/min;檢測波長：360nm;柱溫：30℃;進(jìn)樣量：10μL;理論板數(shù)按金絲桃苷峰計(jì)算應(yīng)不低于5000。

　　1-金絲桃苷 1-Hyperin

　　圖1 對照品(A)和樣品(B)的色譜圖

　　Fig.1 Chromatograms of reference substance(A)and sample(B)

　　1.2.2 對照品溶液的制備

　　精密稱取金絲桃苷對照品10.12mg，置100mL量瓶中，加80%甲醇使溶解并定容至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。精密吸取2mL，置10mL量瓶中，加80%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

　　1.2.3 供試品溶液的制備

　　取本品粉末(過四號篩)1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇50mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250w，頻率40kHz)1小時(shí)，放冷，再稱定重量，加80%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

　　1.2.4 線性關(guān)系考察

　　精密吸取“1.2.2” 項(xiàng)制備的對照品貯備液0.5，1，2，3，5，10mL，置10mL量瓶中，加80%甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別吸取上述溶液10μL，按“1.2.1”項(xiàng)色譜條件測定，以進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)(X：mg/mL)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)(Y ：mAU*s)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：Y = 208.3 1X - 0.0134，r = 0.999 94。結(jié)果表明，金絲桃苷在0.00506~0.1012mg/mL的范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

　　1.2.5 精密度試驗(yàn)

　　精密吸取“1.2.2”項(xiàng)下制備的對照品溶液10μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測定峰面積，結(jié)果RSD=0.22%，表明本法精密度良好。

　　1.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

　　取供試品溶液于制備后0、2、4、6、8、10h進(jìn)樣，金絲桃苷峰面積的RSD=0.59%，表明供試品溶液在10h內(nèi)穩(wěn)定。

　　1.2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

　　稱取同一批樣品6份，按“1.2.3”項(xiàng)下方法處理并測定含量，結(jié)果金絲桃苷RSD=1.17%，表明此方法重復(fù)性較好。

　　1.2.8 回收率試驗(yàn)

　　稱取已知含量的樣品6份，分別精密加入一定量的對照品，按“1.2.3”項(xiàng)下方法處理并測定含量，分別計(jì)算樣品加樣回收率(結(jié)果見表1)，平均回收率為98.77%，RSD=1.57%。

　　表1 金絲桃苷回收率試驗(yàn)結(jié)果

　　2 討論與總結(jié)

　　2.1 流動(dòng)相的選擇

　　本實(shí)驗(yàn)通過對乙腈-水、乙腈-0.1%磷酸溶液等多種不同比例的流動(dòng)相進(jìn)行比較試驗(yàn)，結(jié)果乙腈-0.1%磷酸溶液比例為15:85的系統(tǒng)分離效果較好，且峰形較好，故選擇本系統(tǒng)為流動(dòng)相。

　　2.2 含量測定的討論

　　本實(shí)驗(yàn)中1.2.9樣品的含量測定中第二批的含量和其它兩批含量差異較顯著，分析原因可能與覆盆子來源不同有關(guān)系，因此，仍需做大量實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證。

　　2.3 含量與功效的關(guān)系

　　本實(shí)驗(yàn)確定了覆盆子中的黃酮類化合物為金絲桃苷，但是金絲桃苷含量的高低與覆盆子的功效之間的聯(lián)系仍不明確，還有待進(jìn)一步研究。