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淺析高效毛細管電泳技術與現代中藥

來源:期刊VIP網所屬分類:檢驗醫學時間:瀏覽:

  一種中藥材含有多種有效成分,通常各化學組分結構比較復雜,種類多樣且在藥材中含量不高,用普通的分離方法難以完全分離和定量測定,而多味藥材組成的復方的成分測定,普通的分離方法就更加難以勝任了,毛細管電泳可以較好的解決這一問題。

  關鍵詞:高效毛細管電泳,現代中藥,有效成分,鑒別,制劑

  中藥是我國的傳統國粹,但是由于中藥成分和用藥種類的復雜性,其傳統研究方法已嚴重影響了我國中藥事業的國際化發展。為加快我國中藥的現代化和國際化進程,新的研究方法必須依賴和采用現代儀器技術的應用。高效毛細管電泳技術作為一種新興的分析分離技術,由于自身的特點和優勢在中藥的現代研究具有廣闊的發展前景。本文就近五年來,高效毛細管電泳技術在中藥中的應用及新的發展作一簡要綜述。

  1高效毛細管電泳的發展概況及分離原理

  高效毛細管電泳(high performance capillary electrophoresis,HPCE) 又稱毛細管電泳 (capillary electrophoresis, CE)是以高壓電場為驅動力,毛細管為分離通道,依據樣品中各組分之間淌度和分配行為上的差異而實現分離的一類液相分離技術,具有分離效率高、速度快、靈敏度高,所需樣品少、成本低、抗污染能力強等特點。其理論始于20世紀60年代末,80年代取得技術上的突破,目前已形成毛細管區帶電泳(capillary zone electrophoresis,CZE),膠束電動毛細管色譜(micellar electrokinetic capillary chromatography, MECC),毛細管等速電泳(capillary gel electrophoresis, CGE),毛細管等電聚焦電泳(capillary isoelectric focusing, CIEF)及毛細管電色譜(capillary electrochromatography,CEC)等分離模式[1]。儀器由一個高壓電源、一根毛細管、一個檢測器和兩個供毛細管兩端插入而又可和電源相連的緩沖液貯瓶組成,工作原理是在pH>3的情況下,石英毛細管硅膠表面帶負電與溶液接觸時形成一雙電層,在高電壓作用下,雙電層中的水合陽離子引起溶液在毛細管內整體向負極方向流動,形成電滲流(EDF),粒子在毛細管電解質溶液中的遷移速度,等于電泳和電滲流兩種速度的矢量和,正離子電泳方向和電滲一致,先流出;中性粒子電泳速度為零,其遷移速度相當于電滲流速度;負離子運動方向和電滲流方向相反,最后流出,從而實現不同組分分離的目的。

  2在中藥有效成分分離測定中的應用

  郝紅艷等[2]利用膠束電動毛細管電泳分析法建立中藥罌粟殼中3種生物堿―嗎啡、可待因和罌粟堿的含量測定法,其測定結果于HPLC法一致。紀秀紅等[3]運用毛細管區帶電泳模式對十大功勞屬植物中3種生物堿的含量進行測定,結果表明該法具有簡便、快速、有效的特點,可用于中藥材的質量控制。陳勇川等[4]采用高效毛細管電泳法測定槐花和槐角中蘆丁的含量,方法準確、快速、簡便、經濟。李琴韻等[5]采用HPCE―CZE法對中國藥典收載的3個不同品種的14個吳茱萸樣品(不同產地)中所含吳茱萸堿進行含量測定,同時還在兩種波長下,建立了吳茱萸樣品的高效毛細管電泳色譜指紋譜,能將3種不同品種的吳茱萸明顯地區分,揭示了其內在質量,方法準確、簡便。趙霞等[6]以毛細管區帶電泳模式,用內標法分析了 9種貝母藥材中浙貝乙素、西貝素、西貝苷等生物堿的含量,結果表明毛細管電泳法可以完全分離貝母藥材中的這3種生物堿,并有較好的回收率和重現性。邢鳳琴等[7]采用高效毛細管區帶電泳模式,對黨參樣品所含活性成分中的4種有機酸類成分進行分離與測定,樣品和標準品在20 min內得到基線分離,且具有良好的準確性和重現性。

  3在中藥制劑生產質量控制中的應用

  中藥制劑成分復雜,目前其質量控制的方法多是測定其中一種指標成分的含量,但這種方法不能完全體現出中藥制劑的整體質量,尤其是復方制劑的整體質量。 隨著毛細管電泳的采用,分析工作者對中藥制劑中多種組分的測定進行了深入研究。尹茶等[8]建立了同時測定銀翹解毒片中綠原酸、甘草酸和甘草次酸的高效毛細管電泳法,結果表明:HPCE能在10 min內完成銀翹解毒片中3種有效成分的測定,靈敏度高,適于中成藥中多種有效成分的同時測定。史國兵等[9]建立中成藥九如天寶液毛細管電泳的方法,繪制出相關指紋圖,考察了四種不同柞蠶蛾提取物的九如天寶液與市售九如天寶液的指紋圖譜的差異,認為,圖譜特征明顯、專屬性強、可為鑒別該藥物的真偽提供科學依據;毛細管電泳技術在中藥的指紋圖譜和質量控制研究中將發揮更大的作用。陳玉英等[10]采用高效毛細管電泳法測定了10批供試樣品的HPCE指紋圖譜,建立相關的梔子藥材的指紋圖譜,并對該方法學進行考察,結果符合《中藥注射劑指紋圖譜研究的技術要求(暫行)》中有關規定,結論為該方法可作為控制以含梔子等中藥制劑的內在質量。

  4在中藥材鑒別中的應用

  雖然目前中藥材的鑒別已采用許多現代的儀器方法,但是這些方法在應用中仍存在著不少缺陷,利用毛細管電泳技術測定中藥材中的有效成分如有機酸、蛋白質、多肽、氨基酸、生物堿和酶等,分析活性成分的指紋圖譜,不僅對中藥的其道地性 (地理分布)、引種與分化變異的本質從分子水平闡釋提供嶄新的客觀依據,也是對常規鑒別方法有益的補充。王德先等[11]利用毛細管電泳法鑒別天麻及其 4種常見偽品以及測定天麻中有效成分天麻素,通過比較電泳譜圖和天麻素加標實驗,4種偽品與天麻可以很容易鑒別,天麻中的天麻素可以達基線分離。王寅等[12]以HPCE法對不同屬群大青葉藥材的理化特征差異進行研究,結果表明異地栽培的不同屬群大青葉藥材酸性提取部位的化學成分及含量有顯著差別,依據電泳圖譜中特征峰的遷移時間和峰面積,能有效鑒別不同屬群的大青葉藥材。孫沂[13]等采用毛細管區帶電泳法建立10批紅花道地藥材的指紋圖譜,同時將9個產地的紅花藥材以及紅花的對照藥材加以比較,結果顯示在紅花道地藥材的指紋圖譜中,共有峰的相對遷移時間的RSD<1.8 %,相對峰面積的RSD<6.2 %;在不同產地紅花藥材的指紋圖譜中, 共有峰的相對峰面積有一定的差別。林瑞超等[14]采用MECC分離模式,建立了卷柏屬11種不同藥用植物的HPCE指紋圖譜, 表明不同地域的卷柏屬植物中黃酮類化合物的分布存在明顯差別,可用于卷柏屬藥用植物的鑒別。

  5結語

  高效毛細管電泳以其高效、快速、簡便且柱不易受污染而優于 HPLC法,在中藥有效成分的分離、定性定量、中藥材鑒別,手性化合物的拆分等方面應用將越來越廣泛,目前仍存在重現性較差、線性范圍窄和靈敏度較低等缺陷。隨著商品儀器經不斷改進和完善,加上自動進樣器的普遍使用,基本可以克服重現性差的缺陷,與常規HPLC法接近;靈敏度低可通過在柱預濃縮如場放大堆積效應,或經濃縮預處理如固相萃取等技術加以改善。此外,HPCE法可與其它進樣技術如流動注射聯用,不但可提高測定精度,而且能完成連續自動進樣及在線分析,方便大批量樣品的測定,或采用 CEMS、CENMR及 CEMSMS的聯用技術,充分利用HPCE的高分離效率和MS或NMR的高靈敏度與定性鑒定能力,快速完成眾多復雜成分的分離與結構鑒定,將大大提高和拓寬了CE的性能和應用范圍,更適用于中藥復雜化學成分的分離與測定。相信在不久的將來,隨著新型分離技術的應用,中藥現代化的進程必取得輝煌成就。

  參考文獻:

  [1]朱濤,方曉紅,孫亦梁. 高效毛細管電泳:分析化學中的一個新的前沿領域 [J]. 化學進展,1994,6(3):229229.

  [2]郝紅艷,郭濟賢,順慶生,等. HPLC和HPCE法測定罌粟殼中 3種生物活性生物堿 [J].藥學學報,2000,35( 4):289289.

  [3]陳勇川,穆海川,劉松青. 高效毛細管電泳法測定槐花和槐角中蘆丁的含量[J]. 華西藥學雜志,2002,17(4):284284.

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