摘 要： 該研究以低劑量(5 mg·kg-1)、中劑量(30 mg·kg-1)和高劑量(60 mg·kg-1)的辣木葉乙醇提取物(EE-MO)干預(yù)高脂飲食誘導(dǎo)的非酒精性脂肪肝(NAFLD)小鼠動(dòng)物模型。結(jié)果表明：(1)高劑量的EE-MO顯著降低NAFLD小鼠的體重和肝濕重;EE-MO劑量依賴性地降低NAFLD小鼠血清TC、TG、HDL-C和LDL-C含量;高劑量的EE-MO除降低上述生化指標(biāo)外，還顯著降低血清中FFA含量。(2)HE和蘇丹紅Ⅲ染色發(fā)現(xiàn)，EE-MO處理后，模型組小鼠的肝脂肪病變和細(xì)胞損傷得到顯著改善。(3)EE-MO對NAFLD小鼠模型的血脂代謝具有改善作用。(4)高脂飲食誘導(dǎo)小鼠肝臟和血清的ROS和MDA的含量，誘導(dǎo)SOD、POD和CAT活性增加，降低GSH-Px活性。(5)低劑量、中劑量和高劑量的EE-MO依賴性地降低NAFLD小鼠肝臟和血清的ROS和MDA的含量，緩解氧化脅迫。(6)低劑量的EE-MO對SOD、POD、CAT和GSH-Px酶活性無顯著影響;中劑量和高劑量的EE-MO處理后，NAFLD小鼠的SOD、POD和CAT酶活性顯著下降，GSH-Px活性顯著增加;EE-MO可能通過GSH-Px抗氧化酶途徑緩解NAFLD小鼠的氧化脅迫。

　　關(guān)鍵詞： 辣木， 氧化應(yīng)急， 非酒精性脂肪肝， 血脂

　　《煙臺(tái)果樹》(季刊)創(chuàng)刊于1980年，由煙臺(tái)市農(nóng)科院果樹科學(xué)研究所主辦。《煙臺(tái)果樹》發(fā)行量大(年發(fā)行16萬冊),覆蓋面廣,讀者遍及全國各地。

　　辣木(Moringa oleifera)為辣木科辣木屬植物，有“奇跡之樹”的美稱，是一種有獨(dú)特經(jīng)濟(jì)價(jià)值的熱帶植物。辣木原產(chǎn)于印度，從20世紀(jì)開始，我國的云南、廣東、廣西、福建、貴州、臺(tái)灣等省(區(qū))開展了辣木引種種植和產(chǎn)業(yè)化開發(fā)研究。辣木渾身是寶，根皮是傳統(tǒng)醫(yī)藥原料，嫩葉和嫩果是味道和營養(yǎng)都豐富的蔬菜，種子富含植物油，在國際市場上十分緊俏。

　　據(jù)測定，辣木的蛋白質(zhì)含量為牛奶的2倍、鈣為牛奶的4倍、鉀為香蕉的2倍、鐵為波菜的2倍、維生素C為柑桔的7倍、維生素A為胡蘿卜的4倍、維生素E分別是螺旋藻和黃豆粉的70倍和40倍(劉昌芬和李國華，2004)。現(xiàn)代藥理學(xué)的研究表明，辣木有退熱、消炎、排石、利尿、降壓、降血脂和抗氧化等功效。在印度和非洲國家辣木常用于治療糖尿病、高血壓、心血管病和肥胖癥等(Anwar et al.， 2007; Fahey， 2005; Ghasi et al.， 2000;Song et al.，2017)。楊倩等(2017)發(fā)現(xiàn)，不同劑量的辣木水提取物能降低高脂膳食誘導(dǎo)的肥胖大鼠血清TC、TG、HDL-C和LDL-C含量。正常的SD大鼠喂食辣木葉粉后，血清中甘油三酯和膽固醇含量顯著低于對照組(張幸怡等，2016)。

　　此外，辣木提取物還具有較好的抗氧化作用。體外研究發(fā)現(xiàn)，辣木葉乙醇提取物(ethanol extract of Moringa oleifera， EE-MO)對DPPH、ABTS和OH自由基的清除率與正對照BHT相似(周偉等，2017)。辣木莖葉中的水溶性多糖對羥自由基及超氧陰離子均有清除作用，且具有劑量依賴性(梁鵬和甄潤英，2013)。在大鼠腎和心肌缺血再灌注模型中，辣木籽提取物能顯著降低模型組動(dòng)物血清的MDA含量，增加血清及腎或心臟中谷胱甘肽過氧化物酶活性，緩解氧化脅迫(曲震理， 2016; 曲震理等， 2017)。

　　非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的進(jìn)展是一個(gè)緩慢的過程，包括單純性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、脂肪性肝纖維化和肝硬化，部分患者甚至可進(jìn)展為肝細(xì)胞癌。近年來，隨著人們生活水平的提高和生活方式的改變，我國的NAFLD發(fā)病率明顯上升且呈年輕化趨勢，現(xiàn)在NAFLD已經(jīng)成為僅次于病毒性肝炎的第二大肝病。 NAFLD的發(fā)病機(jī)制尚未完全明確，目前認(rèn)為主要與胰島素抵抗(IR)、氧化應(yīng)激、炎癥作用、庫普弗細(xì)胞與細(xì)胞因子、脂代謝紊亂和鐵超載等相關(guān)(Loomba & Sanyala，2013)。其中，氧化應(yīng)激和脂代謝紊亂在NAFLD肝細(xì)胞損傷過程中具有十分重要的作用。本文主要研究EE-MO對NAFLD小鼠模型血脂和氧化應(yīng)激的影響，探索EE-MO在改善NAFLD癥狀方面的有效性，并揭示可能的機(jī)理，為辣木的進(jìn)一步合理開發(fā)提供依據(jù)和參考。

　　1 材料與方法

　　1.1 EE-MO的制備

　　辣木葉購于云南省昆明市螺螄灣藥材市場。稱取2.5 kg干燥的辣木葉，粉碎后，加95%乙醇室溫提取3次(每次為6 L，24 h)。合并提取液后，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收乙醇至無醇味。醇提物用冷凍干燥機(jī)進(jìn)行冷凍干燥，得到干燥粉末狀的醇提物。

　　1.2 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和分組

　　共有55只SPF級(jí)小鼠，隨機(jī)選取10只為正常對照組 (N-CK)，其余45只為模型組。參考鐘嵐等(2000)的方法復(fù)制脂肪肝大鼠模型，用88%普通飼料、10%豬油、2%膽固醇制成的混合飼料，經(jīng)機(jī)器生產(chǎn)壓制成條狀，制成高脂飼料。正常組始終喂以普通飼料，模型組喂以高脂肪飼料。模型組從第5周開始從背部后側(cè)注射40%的CCl4豆油溶液，正常組注射純豆油溶液，注射劑量為2 μL·g-1，每周2次，共3周。

　　造模8周后，隨機(jī)選擇5只模型組小鼠處死，取出肝臟做病理切片，檢查模型是否復(fù)制成功，確定成功后，從第8周開始，將模型組分為模型對照組(M-CK)、低劑量辣木葉處理組(D-LM)、中劑量辣木葉處理組(Z-LM)和高劑量辣木葉處理組(G-LM)。每天早上9：00，D-LM、Z-LM和G-LM處理組小鼠分別用5、30和60 mg·kg-1的辣木葉提取物灌胃，M-CK處理組給予等體積的生理鹽水灌胃。處理期間，N-CK組小鼠繼續(xù)用普通飼料喂養(yǎng)，所有模型組的小鼠用高脂飼料喂養(yǎng)。持續(xù)2周后，將所有小鼠處死，取其血液和肝臟組織，做后續(xù)生化指標(biāo)和病理學(xué)檢測。

　　1.3 血液和肝組織生理生化指標(biāo)檢測

　　TC、TG、HDL-C、LDL-C和FFA含量與ALT和AST活性均采用試劑盒測定。所有操作按照試劑盒說明進(jìn)行。其中，TC和TG含量所用試劑盒購于上海生物工程技術(shù)有限公司。HDL-C、LDL-C和FFA含量所用試劑盒購于大連TAKARA公司。ALT和AST活性測定所用試劑盒購于中國上海西格瑪奧德里奇貿(mào)易有限公司。

　　1.4 抗氧化物酶活性測定

　　用氮藍(lán)四唑法測定SOD酶活性，用愈創(chuàng)木酚法測定POD酶活性，用紫外速率法測定CAT酶活性，用分光光度計(jì)比色法測定GSH-Px活性。

　　1.5 MDA和ROS含量測定

　　脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)含量采用硫代巴比妥酸分光光度法測定，ROS含量采用Luminol化學(xué)發(fā)光法測定(Faulkner & Fridovich，1993)。

　　1.6 HE染色

　　將肝臟組織碎片放入4%多聚甲醛磷酸鹽緩沖液浸泡固定24 h，取出，用自來水沖洗4 h后，依次用50%、70%、80%、90%和100%乙醇浸泡脫水。將脫水后的標(biāo)本用二甲苯浸泡2次(每次15 min)。用石蠟包埋后，進(jìn)行切片。切片先依次放入二甲苯I和II進(jìn)行浸泡脫蠟，然后用95%、85%、70%和50%的梯度酒精溶液中依次浸泡2 min蒸餾水沖洗2 min。標(biāo)本經(jīng)蘇木素浸染5～15 min和1%伊紅水浸染1～5 min，脫水，透明后進(jìn)行鏡檢。

　　1.7 蘇丹紅Ⅲ染色

　　參照馬羽萍等(2010)的方法。

　　2 結(jié)果與分析

　　2.1 EE-MO處理對NAFLD小鼠模型體重和肝濕重的影響

　　如表1所示，高脂飲食8周后，M-CK組小鼠的體重顯著高于N-CK組。用低劑量的EE-MO干預(yù)2周后，小鼠體重與M-CK組相比無顯著性差異。用中、 高劑量的EE-MO干預(yù)2周后， 小鼠的體重與M-CK組相比有下降的趨勢，雖然Z-LM組小鼠的體重與M-CK組相比仍無顯著性差異，但G-LM組小鼠體重顯著低于M-CK組。肝濕重與體重的變化趨勢類似，M-CK組小鼠的肝濕重顯著高于N-CK組。用EE-MO干預(yù)2周后，D-LM和Z-LM組與M-CK組小鼠肝濕重?zé)o顯著性差異，而G-LM組肝濕重顯著低于M-CK組。

　　2.2 EE-MO處理對NAFLD小鼠模型肝TC、TG、HDL-C、LDL-C及FFA含量的影響

　　如圖1：A所示，高脂飲食8周后，M-CK組小鼠血清的TC和TG含量均顯著高于N-CK組。EE-MO能夠劑量依賴性降低模型組小鼠血清TC和TG的含量。血清LDL-C和HDL-C含量的變化趨勢與TC和TG含量變化趨勢類似。M-CK組小鼠血清的LDL-C和HDL-C含量均顯著高于N-CK組，用EE-MO處理后，NAFLD小鼠模型的LDL-C和HDL-C含量均顯著降低 (圖1：B)。高脂飲食后，M-CK組血清的FFA含量顯著高于N-CK。用不同劑量提取物處理后，D-LM和Z-LM組的血清FFA含量與M-CK組無顯著性差異，而G-LM組顯著低于M-CK組 (圖1：C)。

　　2.3 EE-MO處理對NAFLD小鼠模型血清ALT和AST活性的影響

　　如圖2所示，NAFLD小鼠模型血清ALT和AST的變化趨勢類似，高脂飲食誘導(dǎo)血清ALT和AST活性均顯著增加。EE-MO處理后，NAFLD小鼠模型的ALT和AST活性顯著下降，且具有劑量依賴性，即血清ALT和AST的活性大小順序?yàn)镈-LM>Z-LM>G-LM。