摘 要：為掌葉覆盆子的組培快繁篩選最佳培養(yǎng)基配方。以掌葉覆盆子優(yōu)良單株NS8一年生枝條為外植體，在不同激素成分及濃度水平下進(jìn)行組織培養(yǎng)試驗(yàn)。結(jié)果表明：最適宜的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+6BA 1.5 mg·L-1+NAA 0.15 mg·L-1+GA3 0 mg·L-1，誘導(dǎo)率達(dá)到68%，芽苗健壯;最佳增殖培養(yǎng)基為MS+6BA 1.5 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1，苗勢健壯，增殖系數(shù)達(dá)到4.87;最佳生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA 0.6 mg·L-1+IBA 0.2 mg·L-1+活性炭0.8 g·L-1，生根率達(dá)到95.3%，生根數(shù)達(dá)到5.7條，根長達(dá)到5.8 cm，根系發(fā)達(dá)，苗勢健壯。結(jié)果表明篩選出的最佳培養(yǎng)基配方適宜本土掌葉覆盆子品種的組培快繁，為在短期內(nèi)獲得大量優(yōu)質(zhì)種苗及大規(guī)模商業(yè)化生產(chǎn)提供依據(jù)。

　　關(guān)鍵詞：野生資源;掌葉覆盆子;組織培養(yǎng);快速繁殖

　　掌葉覆盆子Rubus chingii Hu為薔薇科Rosaceae懸鉤子屬Rubus L.多年生漿果類藤本灌木，其未成熟的干燥果實(shí)具有益腎、固精、縮尿等功效[1-2]，是重要的傳統(tǒng)中藥材，在治療亞健康及中老年保健領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。成熟果實(shí)酸甜可口，味道鮮美，營養(yǎng)豐富，藥食兼用，被譽(yù)為繼柑橘、獼猴桃之后的第三代新型水果[3]。福建省武夷山市和浙江省淳安縣是掌葉覆盆子的重要發(fā)源地，擁有豐富的野生掌葉覆盆子資源[4-5]。南平市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所從2016年開始調(diào)查和收集兩地野生掌葉覆盆子，并從大量的群體中篩選出生長勢強(qiáng)，株型挺拔，果實(shí)碩大，果心小、風(fēng)味濃郁、色澤艷麗、抗病性強(qiáng)的藥用和鮮食采摘型品種，可在福建、江西、浙江等南方丘陵山地種植。

　　掌葉覆盆子傳統(tǒng)的繁殖方式為采挖野生苗、種子繁殖、根蘗繁殖、分株繁殖等[6-8]。過度采挖野生苗對野生資源破壞大，種子繁殖發(fā)芽率偏低[9]，根蘗和分株繁殖對母株的傷害較大，影響母樹的產(chǎn)量。傳統(tǒng)的繁殖方法，或繁殖系數(shù)過低，或株間差異較大，群體良莠不齊，同時(shí)長期采用無性繁殖，會(huì)促使病毒積累，往往造成產(chǎn)量和品質(zhì)下降。通過組織培養(yǎng)方式繁殖種苗，可以對植株進(jìn)行脫毒復(fù)壯，固定優(yōu)良品種性狀，防止品種退化，具有繁殖周期短、繁殖速度快、繁殖系數(shù)高、植株性狀整齊一致，種苗質(zhì)量好等優(yōu)點(diǎn)。劉計(jì)權(quán)[1]研究認(rèn)為，掌葉覆盆子的生根培養(yǎng)中無須添加外源激素也能生根，且其生長勢明顯高于非組培苗;孫長清[10]對掌葉覆盆子的生物學(xué)特性進(jìn)行了較為細(xì)致的研究，發(fā)現(xiàn)根插條用50 mg·L-1的ABT1生根粉浸泡0.5、1 h后，可提高生根率，但出芽率下降;潘彬榮等[2]研究認(rèn)為，利用莖段能誘導(dǎo)出不定芽，最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+6BA 1.5 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1，最佳分化培養(yǎng)基為MS+KT 2.0 mg·L-1+NAA 0.4 mg·L-1，最佳生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA 0.2 mg·L-1，平均每株生根4.8條;王利平等[11]研究認(rèn)為，當(dāng)年生莖段可誘導(dǎo)出不定芽，最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+6BA 0.5 mg·L-1+NAA 0.01 mg·L-1，最佳繼代培養(yǎng)基為MS+6BA 1.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1，最佳生根培養(yǎng)基為MS+NAA 0.1 mg·L-1+IBA 0.1 mg·L-1。

　　目前福建省掌葉覆盆子組培快繁技術(shù)的研究較少，而隨著地域和品種的不同，往往導(dǎo)致研究結(jié)果差異較大，所以其他地區(qū)和品種的研究只能為福建省掌葉覆盆子的組培快繁技術(shù)提供一定的數(shù)據(jù)支持。為此南平市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所在調(diào)查、收集、選育野生掌葉覆盆子及前人工作的基礎(chǔ)上，開展組培快繁技術(shù)研究，期望篩選出適宜本地掌葉覆盆子品種的各培養(yǎng)階段最佳培養(yǎng)基配方，為在短期內(nèi)獲得大量優(yōu)質(zhì)種苗及大規(guī)模商業(yè)化生產(chǎn)提供依據(jù)。

　　1 材料和方法

　　1.1 試驗(yàn)材料

　　以自選的南平市野生掌葉覆盆子優(yōu)良單株NS8作為供體材料，以其一年生帶芽嫩枝莖段為外植體。

　　1.2 試驗(yàn)方法

　　1.2.1 外植體處理和消毒 在晴天，選擇無病蟲的健康植株，剪取一年生帶芽枝條，剪去所有葉片，用柔軟牙刷輕刷洗凈，放在洗衣粉溶液下浸泡30 min，撈起洗凈后，放在自來水下沖洗2 h，在超凈工作臺(tái)上用無菌水清洗2次，用75%酒精消毒30 s，然后用0.1%升汞溶液消毒6～12 min，再用無菌水沖洗6遍，將帶芽莖段用無菌紙吸干后接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)。

　　1.2.2 不定芽的誘導(dǎo) 采用L16(43)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，對帶芽莖段最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。共選用3個(gè)激素，每個(gè)激素設(shè)4個(gè)濃度水平(mg·L-1)，6

　　BA 0.5、1.0、1.5、2.0 mg·L-1，NAA 0、0.05、0.15、0.25 mg·L-1，GA3 0、0.3、0.5、0.7 mg·L-1，共16個(gè)處理。每個(gè)處理接種30瓶，每瓶接種2個(gè)帶芽莖段，3次重復(fù)，30 d后調(diào)查誘導(dǎo)率。

　　1.2.3 不定芽的增殖 6BA濃度為1.0、1.5、2.0 mg·L-1，NAA濃度為0.05、0.10、0.15 mg·L-1，完全隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，共9個(gè)處理。每瓶接10個(gè)不定芽，10瓶為一重復(fù)，設(shè)3個(gè)重復(fù)，30 d后調(diào)查其增殖系數(shù)。

　　1.2.4 不定芽的生根培養(yǎng) NAA+IBA的濃度分別為0.3 mg·L-1+0 mg·L-1、0.6 mg·L-1+0 mg·L-1、0.9 mg·L-1+0 mg·L-1、0 mg·L-1+0.2 mg·L-1、0 mg·L-1+0.4 mg·L-1、0 mg·L-1+0.6 mg·L-1、0.3 mg·L-1+ 0.1 mg·L-1、0.6 mg·L-1+0.2 mg·L-1，共8個(gè)處理，每處理接種10瓶，每瓶接10個(gè)不定芽，設(shè)3個(gè)重復(fù)，45 d后調(diào)查其生根數(shù)、根長(cm)、生根率。

　　1.2.5 培養(yǎng)條件 將消毒處理好的外植體接入誘導(dǎo)培養(yǎng)基，35 d后將誘導(dǎo)出的帶3～4節(jié)的小苗剪成帶芽莖段，轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基上，培養(yǎng)15 d左右，芽苗基部長出大量的不定芽，當(dāng)不定芽長到2～3 cm時(shí)，轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上。誘導(dǎo)和增殖階段以MS為基本培養(yǎng)基，食用白糖30 g·L-1，卡拉膠7 g·L-1，pH 5.8。生根階段以1/2MS為基本培養(yǎng)基，食用白糖20 g·L-1，卡拉膠7 g·L-1，活性炭0.8 g·L-1，pH 5.6。培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度(25±1)℃，光照每天12 h，光照強(qiáng)度2000 lx。

　　1.2.6 統(tǒng)計(jì)及分析方法 試驗(yàn)結(jié)果用Minitab 19軟件進(jìn)行方差分析和Fisher LSD多重比較，顯著性水平為P<0.05。誘導(dǎo)率為出芽株數(shù)/無污染株數(shù)， 增殖系數(shù)為總芽數(shù)/接種芽數(shù)， 生根率為生根株數(shù)/總株數(shù)。

　　2 結(jié)果與分析

　　2.1 不同培養(yǎng)基對外植體誘導(dǎo)率的影響

　　帶芽莖段接種10 d后開始出現(xiàn)芽點(diǎn)，20 d后芽苗長至2～3 cm(表1)。

　　從表1可知，誘導(dǎo)率主要受6BA影響，隨著6BA濃度的升高，其誘導(dǎo)率呈現(xiàn)先升后降的趨勢。6BA濃度在0.5～1.0 mg·L-1時(shí)，誘導(dǎo)率為0.26～0.46，當(dāng)6BA濃度為1.5～2.0 mg·L-1時(shí)，誘導(dǎo)率為0.64～0.77，和6BA濃度在0.5～1.0 mg·L-1相比，誘導(dǎo)率明顯提高，達(dá)到顯著水平。NAA會(huì)加速泡沫狀愈傷的形成，濃度越高，泡沫越多，當(dāng)NAA濃度為0.25 mg·L-1時(shí)，泡沫愈傷過多，蓋住了整個(gè)外植體基部，影響誘導(dǎo)芽的形成和生長。GA3主要影響芽苗的長勢，對外植體的誘導(dǎo)沒有影響。當(dāng)GA3為0.5～0.7 mg·L-1時(shí)，芽苗偏細(xì)、高。綜合來說，誘導(dǎo)培養(yǎng)基以處理Y11為最佳，誘導(dǎo)率達(dá)到68%，芽苗健壯。

　　2.2 不同培養(yǎng)基對外植體增殖效果的影響

　　增殖培養(yǎng)基接種7 d左右，小苗基部開始出現(xiàn)小芽點(diǎn)，15 d左右增殖苗慢慢長出。從表2可以看出，6BA和NAA對不定芽增殖系數(shù)都有先升后降的趨勢，當(dāng)6BA濃度在0.5～1.5 mg·L-1時(shí)，隨著6BA濃度的增加，增殖系數(shù)也隨著增加，當(dāng)6BA濃度在1.5～2.5 mg·L-1時(shí)，隨著6BA濃度的增加，增殖系數(shù)開始下降，因此過高的6BA濃度不利于增殖。NAA也有類似的規(guī)律，當(dāng)NAA濃度在0.05～0.10 mg·L-1時(shí)，隨著NAA濃度的增加，增殖系數(shù)也隨著增加;當(dāng)NAA濃度在0.10～0.15 mg·L-1時(shí)，隨著NAA濃度的增加，增殖系數(shù)開始下降。NAA雖然有利于不定芽的增殖，但濃度過高會(huì)產(chǎn)生大量的泡沫狀愈傷，覆蓋整個(gè)不定芽基部，影響不定芽的增殖和生長。

　　從表2和表3可知，6BA和NAA是影響增殖的最主要因素，6BA×NAA的P值=0.07>0.05，因此，6BA和NAA基本沒有互作，獨(dú)立地對增殖發(fā)揮作用。各處理之間增殖系數(shù)有先升后降的趨勢，6BA是影響增殖系數(shù)的主要因素，NAA次之，以處理Z5綜合表現(xiàn)最好，增殖系數(shù)為4.87，增殖苗健壯。

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