摘 要：為比較不同養(yǎng)殖鹽度下凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeus vannamei)抗氧化活力及非特異性免疫狀態(tài)，將平均體長(zhǎng)為(10.6±1.7)cm的對(duì)蝦分為高鹽度組(20‰)和低鹽度組(5‰)，飼養(yǎng)2周后，測(cè)定肝胰腺和血清中的抗氧化酶及免疫相關(guān)酶活力。結(jié)果顯示，凡納濱對(duì)蝦在低鹽度下肝胰腺中谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GPx)、超氧化物歧化酶(SOD)活力及總抗氧化能力(T-AOC)均顯著低于高鹽度組，丙二醛(MDA)含量高于高鹽度組;在低鹽度下，血清中GPx活力、T-AOC顯著低于高鹽度組，MDA含量高于高鹽度組;低鹽度下，對(duì)蝦肝胰腺谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GOT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(GPT)活力顯著下降，而血清GOT和GPT活力顯著升高;低鹽度下，血清和肝胰腺中的酸性磷酸酶(ACP)和堿性磷酸酶(AKP)活力均顯著低于高鹽度組。結(jié)果表明，低鹽度條件下凡納濱對(duì)蝦血清和肝胰腺的抗氧化活力和免疫酶活力均受到抑制，脂質(zhì)過(guò)氧化程度升高，肝胰腺受到一定程度的損傷。

　　關(guān)鍵詞：凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeus vannamei);鹽度;非特異性免疫;抗氧化酶

　　《漁業(yè)研究》(雙月刊)創(chuàng)刊于1972年，是福建省海洋與漁業(yè)廳主管、福建省水產(chǎn)學(xué)會(huì)和福建省水產(chǎn)研究所主辦的學(xué)術(shù)期刊。

　　凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeus vannamei)是世界上主要的經(jīng)濟(jì)蝦類(lèi)之一[1]，占我國(guó)對(duì)蝦養(yǎng)殖總產(chǎn)量比重大[2]。其對(duì)鹽度有較好的適應(yīng)性，能存活于1‰的微咸水和40‰的海水之間[3]，最適生存鹽度為20‰左右[4-5]。鹽度作為水產(chǎn)養(yǎng)殖中的重要環(huán)境因子，對(duì)蝦類(lèi)的生長(zhǎng)、呼吸代謝、存活、滲透壓及免疫力和氧化功能均會(huì)造成不同程度的影響[6-8]。由于凡納濱對(duì)蝦對(duì)鹽度的廣適應(yīng)性以及內(nèi)陸地區(qū)海水運(yùn)輸困難，海水淡化養(yǎng)殖已經(jīng)成為內(nèi)陸地區(qū)的主要養(yǎng)殖模式。

　　但近年來(lái)，低鹽度凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)殖也出現(xiàn)了諸多問(wèn)題。生長(zhǎng)緩慢、成活率低、易爆發(fā)疾病等問(wèn)題嚴(yán)重制約了對(duì)蝦養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。已有研究報(bào)道，不同鹽度對(duì)凡納濱對(duì)蝦的生長(zhǎng)、代謝、體組成等均造成不同程度的影響[9-14]。李雪鶴等[10]的研究結(jié)果顯示12‰鹽度組凡納濱對(duì)蝦的生長(zhǎng)性能要優(yōu)于30‰鹽度組，且鹽度變化可顯著影響糖類(lèi)的代謝。沈敏等[11]研究發(fā)現(xiàn)，高鹽突變幅度越大，凡納濱對(duì)蝦存活率越低，生長(zhǎng)越緩慢，但滲透調(diào)節(jié)能力增強(qiáng)。

　　Cheng等[12]和曹梅等[13]研究證明鹽度變化后，對(duì)蝦產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)，免疫力下降，易感染疾病。李二超[14]報(bào)道了高、中、低(320、17.0和3.0‰)鹽度下凡納濱對(duì)蝦肌肉和肝胰腺超氧化物歧化酶(SOD)和過(guò)氧化氫酶(CAT)的變化，發(fā)現(xiàn)低鹽度下抗氧化酶活力被誘導(dǎo)升高。本研究以20‰適宜鹽度作為對(duì)照，探討低鹽度下對(duì)蝦肝胰腺和血清抗氧化活力和免疫相關(guān)酶活力的變化，以期進(jìn)一步探討低鹽度對(duì)蝦類(lèi)肝胰腺和血清生理生化狀態(tài)的影響及作用機(jī)制，為凡納濱對(duì)蝦在低鹽度環(huán)境下的健康養(yǎng)殖提供參考。

　　1 材料和方法

　　1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

　　凡納濱對(duì)蝦購(gòu)自廣東省廣州市番禺區(qū)某養(yǎng)殖場(chǎng)，平均體長(zhǎng)為(10.6±1.7)cm。對(duì)蝦暫養(yǎng)在溫度為22～24 ℃、pH為7.9～8.0、鹽度為5 ‰的水體中，一周后選取附肢完整、健康狀況良好、處于蛻皮期的對(duì)蝦進(jìn)行試驗(yàn)。

　　1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

　　試驗(yàn)對(duì)蝦在實(shí)驗(yàn)室養(yǎng)殖系統(tǒng)進(jìn)行養(yǎng)殖，設(shè)計(jì)低鹽度(5‰)和高鹽度(20‰)兩組，每組三個(gè)平行，每個(gè)平行30尾蝦。養(yǎng)殖水體初始鹽度為5‰，20‰組水體用日曬海鹽進(jìn)行調(diào)節(jié)，每天進(jìn)行2‰的鹽度提升，使對(duì)蝦適應(yīng)水體鹽度，直至達(dá)到20‰為止。在馴化對(duì)蝦至高鹽度后再養(yǎng)殖兩周以保證對(duì)蝦完全適應(yīng)鹽度環(huán)境。試驗(yàn)養(yǎng)殖過(guò)程中水體保持曝氣并進(jìn)行循環(huán)過(guò)濾，每天按對(duì)蝦體重的3%投喂某品牌商業(yè)飼料。

　　1.3 樣品的制備

　　1.3.1 血清的制備 在養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后進(jìn)行取樣，用1.5 mL一次性注射器吸取200 μL預(yù)冷的抗凝劑(葡萄糖20.5 g/L，檸檬酸鈉8 g/L，氯化鈉4.2 g/L，pH 7.5)，然后從對(duì)蝦的圍心腔抽取等量的血淋巴。置入離心管中并用離心機(jī)離心(3 000 r/min，4 ℃，10 min)，取上清待測(cè)。

　　1.3.2 肝胰腺組織勻漿的制備 養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后取對(duì)蝦肝胰腺，液氮速凍后置于-80 ℃冰箱保存待測(cè)。檢測(cè)前，取肝胰腺稱重(0.2～1 g)，用預(yù)冷的生理鹽水漂洗，去除血液，在濾紙上吸干水分并稱重。稱重后量取9倍組織重量的預(yù)冷生理鹽水，用剪刀剪碎組織塊，倒入玻璃勻漿器中，冰浴狀態(tài)下進(jìn)行勻漿。待組織充分勻漿后離心(4 ℃、3 000 r/min、10 min)，取上清液待測(cè)。

　　1.4 指標(biāo)測(cè)定

　　本試驗(yàn)測(cè)定的谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GPx)、超氧化物歧化酶(SOD)、酸性磷酸酶(ACP)、過(guò)氧化氫酶(CAT)、堿性磷酸酶(AKP)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GOT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(GPT)活力以及總抗氧化活力(T-AOC)、丙二醛(MDA)含量、蛋白質(zhì)含量均使用南京建成生物工程研究所試劑盒，測(cè)定方法均按照試劑盒說(shuō)明書(shū)步驟進(jìn)行。

　　1.5 統(tǒng)計(jì)分析

　　用SPSS 19.0對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤(Mean±SE)表示，P<0.05確認(rèn)為差異性顯著，P<0.01確認(rèn)為差異性極顯著。

　　2 結(jié)果

　　2.1 養(yǎng)殖鹽度對(duì)凡納濱對(duì)蝦抗氧化活力的影響

　　鹽度對(duì)凡納濱對(duì)蝦抗氧化系統(tǒng)酶活力的影響如表1所示。除CAT酶無(wú)顯著變化外(P>005)，肝胰腺中GSH-Px、SOD酶活力和T-AOC在20‰鹽度組均顯著高于5‰鹽度組(P<0.01)。與5‰鹽度組相比，20‰鹽度組血清中GSH-Px酶活力和T-AOC均顯著上升(P<0.01)，而SOD和CAT酶活力無(wú)顯著變化(P>0.05)。5‰鹽度組肝胰腺和血清中的MDA含量均顯著高于20‰鹽度組(P<0.05)。

　　2.2 養(yǎng)殖鹽度對(duì)凡納濱對(duì)蝦轉(zhuǎn)氨酶活力的影響

　　鹽度對(duì)凡納濱對(duì)蝦肝胰腺和血清轉(zhuǎn)氨酶活力的影響如表2所示。5‰鹽度組肝胰腺中的GOT和GPT酶活力均顯著低于20‰鹽度組(P<005)，而血清中的GOT和GPT酶活力均顯著高于20‰鹽度組(P<0.05)。

　　2.3 養(yǎng)殖鹽度對(duì)凡納濱對(duì)蝦免疫相關(guān)酶活力的影響

　　鹽度對(duì)凡納濱對(duì)蝦肝胰腺和血清免疫相關(guān)酶活力的影響如表3所示。與5‰鹽度組相比，20‰鹽度組的ACP、AKP酶活力均顯著上升(P<0.01)。

　　3 討論

　　3.1 鹽度對(duì)蝦類(lèi)抗氧化活力的影響

　　抗氧化系統(tǒng)對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物具有至關(guān)重要的作用。正常情況下生物體內(nèi)的氧化自由基處于動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)，若受到外界因素的干擾機(jī)體產(chǎn)生過(guò)多的自由基，會(huì)造成一系列的氧化損傷，導(dǎo)致機(jī)體的抗病能力下降[15]。當(dāng)機(jī)體內(nèi)自由基平衡破壞時(shí)，抗氧化系統(tǒng)就會(huì)起作用，來(lái)維持機(jī)體內(nèi)的氧化平衡[16]。抗氧化系統(tǒng)是由一系列抗氧化酶組成，主要包括SOD、GSH-Px、CAT。這三種酶是重要的抗氧化酶，它們可以共同催化超氧陰離子自由基生成無(wú)毒化合物，從而降低其毒性[17-19]。T-AOC直接反映蝦體的抗氧化能力，SOD活性間接反映蝦體清除氧自由基的能力，MDA是脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物，其含量反映了機(jī)體脂肪組織受自由基氧化損傷的嚴(yán)重程度[19-20]。鹽度是對(duì)蝦生活環(huán)境中的重要因子，它的變動(dòng)會(huì)影響蝦類(lèi)的生長(zhǎng)、代謝、體組成等。已有研究表明，鹽度的變化能影響多種魚(yú)蝦體內(nèi)抗氧化酶活力的變化。當(dāng)脊尾白蝦(Exopalaemon carinicauda)處于較高或較低的鹽度水平時(shí)，機(jī)體內(nèi)的SOD活力均受到抑制，鹽度的變化會(huì)降低機(jī)體的免疫力，從而導(dǎo)致患病的幾率增加[7]。克氏原螯蝦(Procambarus clarkia)在較高的鹽度時(shí)，肝臟SOD和CAT活力會(huì)顯著升高，并且在達(dá)到一定的高度時(shí)逐漸降低并趨于穩(wěn)定[8]。盡管凡納濱對(duì)蝦經(jīng)過(guò)鹽度的馴化后，可以在較低的鹽度下存活，但是研究顯示其最適的生長(zhǎng)鹽度是20‰[4-5]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示5‰鹽度下，凡納濱對(duì)蝦肝胰腺和血清的抗氧化活力均較低，MDA含量則顯著升高，表明低鹽度下凡納濱對(duì)蝦機(jī)體抗氧化活力受到一定的抑制，機(jī)體受到一定程度的氧化損傷，這與鹽度突變下的脅迫作用相似[7，11]。筆者之前的研究發(fā)現(xiàn)低鹽度養(yǎng)殖條件下，凡納濱對(duì)蝦血細(xì)胞中的活性氧(ROS)和一氧化氮(NO)均顯著升高，而血細(xì)胞免疫力指標(biāo)下降[21]，與本研究結(jié)論一致，表明凡納濱對(duì)蝦雖然經(jīng)過(guò)馴化后能夠在低鹽度條件下進(jìn)行養(yǎng)殖，但是遭受了一定程度的慢性低鹽度脅迫，機(jī)體的抗氧化活力受到一定程度的抑制，機(jī)體受到一定程度的氧化損傷。

　　3.2 鹽度對(duì)蝦類(lèi)轉(zhuǎn)氨酶活力的影響

　　GOT和GPT是參與機(jī)體內(nèi)氨基酸氨基轉(zhuǎn)運(yùn)的一類(lèi)酶，主要存在于動(dòng)物肝組織細(xì)胞中，其活性的高低可以反映機(jī)體內(nèi)氨基的轉(zhuǎn)移活力[22]，也常用于反映機(jī)體肝組織的健康狀態(tài)。潘魯青等[23]研究報(bào)道，當(dāng)凡納濱對(duì)蝦受到重金屬離子脅迫時(shí)，其肝胰腺組織中的GOT和GPT活力顯著下降，而血液中GOT和GPT活力顯著上升，表明對(duì)蝦在重金屬脅迫下肝胰腺受到損傷。在正常生理狀態(tài)下，對(duì)蝦細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)氨酶僅有少量釋放入血淋巴中，因此血清中GOT和GPT活力較低，當(dāng)肝組織發(fā)生炎癥、病變或中毒等而受損時(shí)，肝細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)氨酶便被大量釋放到血淋巴中[24-25]。本研究結(jié)果顯示，與20‰鹽度相比，5‰低鹽度養(yǎng)殖條件下，凡納濱對(duì)蝦肝胰腺中GOT和GPT活力降低，而血清GOT和GPT活力顯著升高，表明對(duì)蝦在低鹽度養(yǎng)殖條件下，肝胰腺受到一定程度的損傷，與抗氧化活力結(jié)果一致。

　　3.3 鹽度對(duì)蝦類(lèi)免疫相關(guān)酶活力的影響

　　ACP和AKP是甲殼動(dòng)物體內(nèi)的兩種非特異性免疫因子，是吞噬細(xì)胞溶酶體的重要組成成分，直接參與機(jī)體內(nèi)的物質(zhì)代謝和細(xì)胞的吞噬作用[26]，在對(duì)蝦體內(nèi)具有防御和消化代謝雙重作用[27-28]，也對(duì)磷酸鈣化、骨骼形成、甲殼素分泌等具有重要作用[9]。研究顯示，對(duì)蝦在受到高鹽脅迫和硝態(tài)氮脅迫時(shí)，磷酸酶均會(huì)被誘導(dǎo)[9，29]。李娜等[9]報(bào)道，ACP和AKP主要在肝胰腺和血淋巴中發(fā)揮作用，隨著高鹽脅迫加重，對(duì)蝦ACP和AKP酶活力呈現(xiàn)先升高后下降的趨勢(shì)，鹽度升高后，對(duì)蝦可能需要通過(guò)消耗更多的ATP去調(diào)節(jié)滲透壓來(lái)適應(yīng)外界環(huán)境的變化，而ACP和AKP催化磷酸酯類(lèi)水解可合成ATP，從而導(dǎo)致了ACP和AKP活力的升高，但鹽度高達(dá)一定的程度時(shí)，兩種磷酸酶活力又受到抑制。本研究結(jié)果顯示，相比20‰的適宜鹽度，在5‰的低鹽度養(yǎng)殖條件下，凡納濱對(duì)蝦的ACP和AKP活力均顯著降低，推測(cè)凡納濱對(duì)蝦可能因長(zhǎng)期受到低鹽度脅迫，機(jī)體受到氧化損傷，生理平衡受到一定的破壞，致使磷酸酶活力受到抑制。

　　4 結(jié)論

　　本研究結(jié)果顯示，凡納濱對(duì)蝦在兩個(gè)不同的養(yǎng)殖鹽度(5‰和20‰)下，其肝胰腺和血清的抗氧化和免疫相關(guān)指標(biāo)均存在顯著的差異。結(jié)果表明，養(yǎng)殖鹽度會(huì)顯著影響凡納濱對(duì)蝦肝胰腺和血清的生理生化狀態(tài)，在20‰鹽度組，對(duì)蝦的抗氧化活力和免疫力均較好，在5‰低鹽度下，對(duì)蝦可能受到慢性低鹽度脅迫，抗氧化活力和免疫力均受到一定程度的抑制，脂質(zhì)過(guò)程氧化程度升高，肝胰腺受損。因此，在低鹽度養(yǎng)殖條件下，為降低低鹽脅迫的不利影響，建議在對(duì)蝦飼料中可定期補(bǔ)充維生素C等抗氧化添加劑以及保肝護(hù)肝添加劑。

　　參考文獻(xiàn)：

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