摘 要：為了使巴戟天配方顆粒的質量標準更加科學規范，通過對15批產自不同地區的巴戟天飲片進行標準湯劑的制備，以及對標準湯劑干膏粉進行研究，確定了巴戟天標準湯劑的出膏率范圍;采用高效液相色譜法對主含成分耐斯糖進行了含量測定，研究了巴戟天配方顆粒的PLC特征圖譜分析方法，并對特征譜圖中的水晶蘭苷進行了指認。結果表明，在以流動相作為提取溶劑、甲醇-水(二者體積比為3∶97)為流動相的條件下，耐斯糖含量的轉移率范圍為73.21%～94.49%，標準湯劑出膏率范圍為49.05%～55.87%。基于巴戟天配方顆粒的標準湯劑特征圖譜研究方法嚴謹、可行，更加科學地闡明了配方顆粒與標準湯劑研究的一致性。

　　關鍵詞：中藥化學;巴戟天;標準湯劑;轉移率;出膏率;特征圖譜

　　《重型汽車》(雙月刊)創刊于1987年，是由中國重汽技術中心主辦的國家級期刊,面向國內外公開發行,是國內重型汽車行業唯一一份公開發行的權威刊物,集技術性與綜合性、理論性與實用性為一體,在汽車類期刊中占具重要地位。

　　巴戟天為茜草科植物巴戟天[WTBX]Morinda officinalis ow的干燥根[1]，是中國著名的“四大南藥”之一[2]，始載于《神農本草經》[3]，味甘辛，性微溫，具有補腎陽、強筋骨、祛風濕之功效，用于治療陽痿遺精、宮冷不孕、月經不調、風濕痹痛、筋骨痿軟等[4]。巴戟天藥材中主要含有蒽醌類、環烯醚萜苷類、多糖類等成分[5-7]。其中，蒽醌類化合物主要有2-羥基-1-甲氧基蒽醌、rubiasin A和rubiasin B等，均具有抗菌、降壓、降脂、抗癌、抗病毒、凝血等活性[8]。環烯醚萜苷類化合物主要包括水晶蘭苷[9]、四乙酰車葉草苷[10]等，具有較強的抗炎鎮痛作用。目前，從巴戟天中分離得到的糖類主要有水溶性多糖(MOP-1)、甘露糖、巴戟甲素(原稱巴戟素)、耐斯糖等多種低聚糖，研究表明其具有顯著的抗抑郁作用。

　　飲片標準湯劑是以中醫理論為指導、臨床應用為基礎，參考現代提取方法，經標準化工藝制備而成的單味中藥飲片水煎劑，其規范了工藝參數和質量標準的建立原則[11]。配方顆粒的各項指標及生產過程必須與標準湯劑確定的質量標準相吻合。本研究按照標準湯劑制備方法，以采自15個不同產地的巴戟天飲片為原料制備標準湯劑，測定15批巴戟天標準湯劑的干膏量，確定出膏率范圍，并對耐斯糖進行含量測定，確定含量及轉移率范圍。經過方法摸索，得出巴戟天標準湯劑的PLC特征圖譜，以期使巴戟天配方顆粒的質量標準更加科學和規范。

　　1 主要儀器與試藥

　　Shimadzu Corporation LC-20AT高效液相色譜儀，Sartouius CPA225D分析天平，水循環真空泵，SENCO Technology Co.Ltd.提供;M-A5002電子天平，浙江余姚市紀銘稱重校驗設備有限公司提供;DG-9140A干燥箱，江蘇太倉精宏儀器設備有限公司提供;超聲波清洗器，江蘇昆山禾創超聲儀器有限公司提供。

　　耐斯糖對照品，批號為111891-201403;水晶蘭苷對照品，批號為111870-201303;乙腈，批號為20161014;甲醇，色譜純，批號為20161020;水，純化水;磷酸，分析純。

　　巴戟天藥材共計15批，經河北省藥品檢驗研究院孫寶惠老師鑒定為正品，樣品來源信息見表1。

　　2 方法與結果

　　2.1 標準湯劑樣品制備

　　取巴戟天飲片100 g，放入2 L圓底燒瓶中，加水提取2次。第一煎加水900 mL，先泡30 min，然后開啟加熱，煮沸后計時60 min;第二煎加水700 mL，煮沸后計時40 min。合并2次煎液，使用孔徑為0.048 mm的過濾材質，在藥液熱時進行過濾。將濾液用旋轉蒸發器于低溫(55 ℃，-0.095 MPa)濃縮，濃縮至相對密度為1.03～1.06(55 ℃)的流浸膏，放置在不銹鋼盤中冷凍干燥，制成標準湯劑干燥粉末[12-18]。

　　2.2 標準湯劑中耐斯糖含量的測定

　　2.2.1 色譜條件

　　以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動相組成水與甲醇體積比為97∶3，采用蒸發光散射檢測器檢測，理論塔板數按耐斯糖峰計算應不低于3 000。

　　2.2.2 對照品溶液的制備

　　取耐斯糖標準品適量，精密稱定，置于50 mL容量瓶中，加入流動相，制成每1 mL含200 μg的溶液。

　　2.2.3 供試品溶液的制備

　　取巴戟天標準湯劑0.2 g，精密稱定，置于150 mL具塞錐形瓶中，精密加入流動相50 mL，稱重，于沸水浴中加熱30 min，放冷，再次稱重，用流動相補足減失的質量，搖勻，過濾，即得[19]。

　　2.2.4 測定方法

　　精密吸取對照品溶液10 μL、對照品溶液30 μL、供試品溶液10 μL，注入液相色譜儀，測定，采用外標兩點法對數方程計算。

　　2.2.5 線性關系考察

　　精密吸取對照品溶液50，100，200，300，400 μL，按“221”所述條件進樣分析，縱坐標為耐斯糖峰面積的對數值，橫坐標為耐斯糖進樣量的對數值，制作標準曲線。結果表明，耐斯糖進樣量在1041 9～8334 9 mg范圍內，回歸方程為Y=1582 9X+5533×10-1，r=0999 7，表明線性關系良好。

　　2.2.6 精密度實驗

　　取巴戟天標準湯劑樣品(標3，下同)，按“2.2.3”所述方法制備供試品溶液，連續進樣6針，測定峰面積(耐斯糖)的RSD值為0.87%，結果表明精密度良好。

　　2.2.7 穩定性實驗

　　取巴戟天標準湯劑樣品，按“2.2.3”所述方法制備供試品溶液，在1，3，6，10，14，18 h進樣測定耐斯糖含量。經計算，各樣品中耐斯糖峰面積的RSD值為1.56%，說明18 h內此樣品溶液穩定。

　　2.2.8 重復性實驗

　　取巴戟天標準湯劑樣品供試品6份，每份0.2 g，精密稱定。按“2.2.3”所述方法處理標準湯劑樣品，按“2.2.1”所述條件進樣測定，計算供試品中耐斯糖含量。6份供試品中耐斯糖含量的RSD值為1.05%，表明該方法重復性良好。

　　2.2.9 加標回收實驗

　　精密稱取巴戟天標準湯劑樣品，共計9份，每份約0.1 g，每3份為一組。于每組中精密加入耐斯糖對照品相當于巴戟天標準湯劑所含耐斯糖量的80%，100%，120%，置于具塞錐形瓶中，按“2.2.1”所述條件進樣10 μL進行測定，耐斯糖平均加標回收率為10080%，加標回收率RSD值為1.51%。表明本方法的準確度良好，結果見表2。

　　2.3 15批標準湯劑出膏率及含量測定

　　按“2.1”所述方法制備15批標準湯劑，標準湯劑出膏率的計算取標準湯劑干燥粉末質量([WTBX]m2)與巴戟天飲片質量(m1)之比值。按“2.2”所述方法測定巴戟天飲片、巴戟天標準湯劑的含量，得到含量轉移率。15批巴戟天飲片及標準湯劑測定結果詳見表3。

　　出膏率=m2/m1，含量轉移率=[SX(]標準湯劑含量×出膏率飲片含量[SX)]×100% 。

　　從表3可以看出，15批巴戟天標準湯劑出膏率為49.05%～55.87%，出膏率平均值為52.08%，SD值為2.24;標準湯劑中耐斯糖含量范圍為70.91～92.45 mg/g，平均值為82.55 mg/g，SD值為7.71;耐斯糖含量轉移率范圍為73.21%～94.49%，均值為84.05%，SD值為4.88。

　　3 巴戟天標準湯劑特征圖譜的建立

　　3.1 色譜條件

　　色譜柱：Agilent公司ZORBAX Eclipse Plus C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);流動相：乙腈-0.03%磷酸溶液，按表4比例進行梯度洗脫;檢測波長：235 nm;流速：1 mL/min;柱溫：30 ℃;進樣量：10 μL。

　　3.2 對照品溶液的制備

　　精密稱取水晶蘭苷對照品12.5 mg，置于50 mL量瓶中，加入25%(體積分數，下同)甲醇定容，制成每1 mL含水晶蘭苷0.25 mg的對照品溶液，即得。水晶蘭苷對照圖譜見圖1。