化橘紅為蕓香科植物化州柚Citrus grandis‘Tomentosa’和柚Citrus grandis(L.)Osbeck.未成熟果實(shí)的干燥外層果皮[1]，前者稱毛橘紅，后者稱光橘紅?；偌t有散寒、燥濕、消痰、利氣等功效，用于風(fēng)寒咳嗽、喉癢痰多、食積傷酒、嘔惡痞悶等[1]?；偌t富含黃酮類等成分，主要為柚皮苷Naringin、野漆樹苷Rhoifolin等[2]。已有人測定了化橘紅中柚皮苷含量[2]，但尚未見測定化橘紅中柚皮苷元含量的報(bào)道。本文以高效液相色譜法測定化橘紅中柚皮苷元含量，并對毛橘紅與光橘紅中柚皮苷元的含量進(jìn)行了比較分析。

　　1 儀器、試藥與材料

　　11 儀器與材料 Summit 580型高效液相色譜儀系列(德國Dionex);Sartorius BP211D電子分析天平(德國);電熱恒溫水浴鍋(北京市醫(yī)療設(shè)備廠)。

　　12 試藥 柚皮苷元對照品(為自己分離所得，經(jīng)綜合解析為柚皮苷元，純度為9856%);甲醇(色譜純);石油醚(60～90℃)、冰醋酸等均為分析純。

　　13 材料

　　毛橘紅1：2000年5月采于廣東省化州市平定鎮(zhèn)，藥材直徑約為70cm;

　　毛橘紅2：2000年4月采于廣東省化州市平定鎮(zhèn)，藥材直徑約為45cm;

　　毛橘紅3：2000年8月采于廣東省化州市平定鎮(zhèn)，藥材直徑不小于4cm;

　　毛橘紅4：2000年8月采于廣東省化州市平定鎮(zhèn)，藥材直徑不小于6cm;

　　毛橘紅5：2002年4月采于廣東省化州市平定鎮(zhèn)，藥材直徑小于30cm;

　　毛橘紅6：2002年4月采于廣東省化州市平定鎮(zhèn)，藥材直徑約為16～26?cm;

　　毛橘紅7：2002年4月采于廣東省化州市平定鎮(zhèn)，藥材直徑約為25cm;

　　毛橘紅8：2002年4月采于廣東省化州市平定鎮(zhèn)，藥材直徑約為35cm;

　　毛橘紅9：2002年4月采于廣東省化州市平定鎮(zhèn)，藥材直徑約為28～44cm;

　　毛橘紅10：2002年6月采于廣東省化州市平定鎮(zhèn)，藥材直徑約為20～54cm;

　　毛橘紅11：2002年6月采于廣東省化州市平定鎮(zhèn)，藥材直徑約為54～68cm;

　　毛橘紅12：2002年6月采于廣東省化州市平定鎮(zhèn)，藥材直徑約為55～65cm。

　　光橘紅1：產(chǎn)自湖南省，藥材直徑約40?cm;

　　光橘紅2：產(chǎn)自廣西省，藥材直徑約70?cm;

　　光橘紅3：購自海南省海南大學(xué)附屬醫(yī)院，市售藥材直徑約92?cm;

　　光橘紅4：購自北京西單金象大藥房，市售藥材直徑約113cm;

　　光橘紅5：購自河南省鄭州市醫(yī)藥總公司醫(yī)藥大廈，市售藥材直徑約105cm;

　　光橘紅6：購自廣東省揭陽市匯康醫(yī)藥有限公司，市售藥材，切片;

　　光橘紅7：購自湖南省常德市吉春堂藥店，市售藥材，切片;

　　光橘紅8：購自云南省楚雄市延壽堂連鎖店，市售藥材，切片;

　　光橘紅9：購自浙江省紹興，市售藥材，切片;

　　光橘紅10：購自山西省太古山西中藥廠藥材經(jīng)銷部，市售藥材，切片;

　　光橘紅11：購自廣西省，市售藥材直徑約30?cm。

　　2 測定方法

　　21 色譜條件 流動(dòng)相A：甲醇，流動(dòng)相B：V水∶V乙酸=61∶4，采用梯度洗脫;色譜柱：MACHEREYNAGEL(1005C18，5μm，250?mm×46mm);流速：10mL/min;檢測波長：283?nm;柱溫：25℃。

　　22 供試品溶液的制備 精密稱定已干燥恒重的樣品1000?g，置索氏提取器中，加石油醚(60～90℃)100?mL，水浴回流提取25?h，棄去石油醚液;待樣品中殘存的石油醚全部揮去后，加甲醇100?mL，再置水浴中回流提取4?h以上，提取至無顏色;放冷，濾過，濾液濃縮并轉(zhuǎn)移至10?mL量瓶中，以甲醇少量分?jǐn)?shù)次洗滌容器及濾紙，洗滌液并入同一量瓶中，甲醇定容至刻度，即得。

　　23 柚皮苷元對照品溶液的制備 準(zhǔn)確稱取經(jīng)干燥(105℃)至恒重的柚皮苷元對照品，加甲醇溶解，制成0088?mg/mL溶液，作為對照品。

　　3 結(jié)果和討論

　　31 吸收波長的確定 進(jìn)行光譜掃描，在283?nm處有一較強(qiáng)吸收峰，故確定283?nm為吸收波長。

　　32 標(biāo)準(zhǔn)曲線 用微量進(jìn)樣器分別準(zhǔn)確吸取對照品溶液各2、4、6、8、10?μL，依次進(jìn)樣，并記錄峰面積。以進(jìn)樣體積(μL)為橫坐標(biāo)、峰面積(mAU?min-1)為縱坐標(biāo)繪制工作曲線，求得柚皮苷元的回歸方程為Y=51419X-07510，r=09999。在0088～0880?μg范圍內(nèi)，柚皮苷元與色譜峰面積呈良好的線性關(guān)系。

　　33 方法學(xué)驗(yàn)證

　　331 穩(wěn)定性試驗(yàn)

　　取同一份供試品溶液，分別在0、15、35、55、25、27?h不同時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行測定，考察保留時(shí)間和峰面積的一致性，柚皮苷元的保留時(shí)間RSD和峰面積RSD分別為0279%和268%。

　　332 精密度試驗(yàn)

　　取同一份供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，考察色譜峰保留時(shí)間和峰面積的一致性，柚皮苷元的保留時(shí)間RSD和峰面積的RSD分別為0304%和204%。

　　333 重現(xiàn)性試驗(yàn)

　　取同一批供試品5份，同法檢測，考察色譜峰保留時(shí)間的一致性，柚皮苷元色譜峰保留時(shí)間RSD為286%。

　　334 回收率試驗(yàn)

　　以同一批樣品1g(5份)，精密稱定，分別準(zhǔn)確加入柚皮苷元對照品各0176?mg，按供試品溶液制備方法制成樣品溶液，各取10μL進(jìn)樣，測定含量，結(jié)果柚皮苷元平均加樣回收率為9549%，RSD=200%，結(jié)果見表1。

　　34 供試品的測定 準(zhǔn)確吸取供試品溶液各10?μL，注入高效液相色譜儀中，按高效液相色譜法進(jìn)行試驗(yàn)，以柚皮苷元對照品為參照物，依法測定并記錄色譜圖。外標(biāo)法計(jì)算含量，結(jié)果見表2，對照品及供試品色譜圖見圖1。

　　35 討論

　　對樣品提取方法中所用溶劑進(jìn)行薄層色譜(TLC)和高效液相色譜(HPLC)考察表明，石油醚中檢測不到柚皮苷元，甲醇中則存在柚皮苷元;而且，方法學(xué)考察也表明，先用石油醚去揮發(fā)油，然后用甲醇提取的方法具有可行性。

　　測定結(jié)果表明，化橘紅中柚皮苷元含量基本均在01～10mg?g-1之間，毛橘紅與光橘紅中柚皮苷元含量無明顯差異。

　　對柚皮苷元含量與藥材直徑進(jìn)行比較的結(jié)果表明：柚皮苷元含量與藥材直徑成反比，直徑越大，含量越低;而直徑大小與果齡(即果實(shí)生長期)成正比，果齡越大，直徑越大，即隨著果齡的增長，柚皮苷元含量逐漸降低，這與化橘紅中總黃酮含量的變化趨勢一致[3]。但化橘紅的指紋圖譜研究顯示柚皮苷元比其他黃酮類成分更穩(wěn)定[4]。因此，柚皮苷元含量有可能作為衡量化橘紅質(zhì)量優(yōu)劣及果齡長短的指標(biāo)之一，為化橘紅的質(zhì)量控制及采收期的確定提供依據(jù)，其確切關(guān)系有待進(jìn)一步深入研究。

　　本文首次建立了測定化橘紅中柚皮苷元含量的HPLC法，方法簡便準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，空白無干擾，適用于化橘紅中柚皮苷元含量測定。

　　參考文獻(xiàn)：

　　[1]中華人民共和國藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典(一部)[S].廣州：廣東科技出版社，2000.56.

　　[2]黃美聲，沈玉剛.反相高效液相色譜法測定化橘紅中柚皮甙的含量[J].中草藥，1990，21(5)：15.

　　[3]袁旭江，林勵(lì)，陳志霞.果齡對化橘紅化學(xué)成分含量的影響[J].中藥新藥與臨床藥理，2003，14(3)：188.

　　[4]袁旭江.化橘紅藥材指紋圖譜及其質(zhì)量研究[D].廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)位論文，2003.39.