【摘要】目的探討藏黨參中是否含有總黃酮成分并利用紫外分光光度法測(cè)定總黃酮的含量。方法用80%的乙醇提取總黃酮，以蘆丁為對(duì)照品，在紫外365nm處測(cè)定。結(jié)果平均加樣回收率為95.13%，RSD為2.8%，總黃酮的含量為0.0875%。結(jié)論該方法準(zhǔn)確可靠，可以作為藏黨參總黃酮的含量測(cè)定的檢測(cè)方法。

　　【關(guān)鍵詞】 藏黨參; 總黃酮

　　Determination of the Content of Total Flavonoid in Codonpsis thalictrifolia WallZHENG Juan, WANG Lifan, HU Huagang, XU SifanCentral University for Nationalities, Institute of Chinese Minority Traditional Medicine, Beijing, 100081, ChinaAbstract：ObjectiveTo determine the content of total flavonoids in Codonpsis thalictrifolia Wall. by UV-spectrometry.MethodsTotal flavonoids was extracted with 80% ethanol and rutin was used as reference substance. The content was detected at 365nm.ResultsThe average recovery rate was 95.13%, RSD was 2.8% and the content of total flavonoids was 0.0875%。ConclusionThis method is simple and reliable and can be used for determination of the content of total flavonoids.

　　Key words：Codonpsis thalictrifolia Wall.; Total flavonoids

　　藏黨參 ，藏藥名為魯堆多吉(herba codonopsis mollis)，是公元18世紀(jì)《晶珠本草》中記載的2 294種藥物之一，全草入藥[1]。本品為桔梗科植物長(zhǎng)花黨參Codonopsis mollis Chipp.的全草, 據(jù)《晶珠本草》記載，分為脈花黨參黑色類和長(zhǎng)花黨參白色類兩種，視為正品[1]。本研究所用的藥材為長(zhǎng)花黨參Codonpsis thalictrifolia Wall.，生長(zhǎng)于青藏高原與西秦嶺相匯處，海拔2 000～3 000 m之間，常被藏族人民用于消炎散腫，滋補(bǔ)壯陽(yáng)，健脾胃，補(bǔ)氣，可治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、神經(jīng)痛、神經(jīng)麻痹、瘡疥癰腫、麻風(fēng)、腳氣病、癔病等[2，3]。

　　通過(guò)研究表明魯堆多吉提取物含有多種有效成分，如多糖，皂苷等(三萜和甾體類)，其中以三萜成分較多[1]。本實(shí)驗(yàn)室已測(cè)定過(guò)多糖和皂苷的含量，分別是24.32%和3.02%[4]。但是尚未檢測(cè)過(guò)藏黨參中總黃酮的含量。本次實(shí)驗(yàn)就是以藏黨參為研究對(duì)象，用紫外分光光度計(jì)首次對(duì)其總黃酮的含量進(jìn)行測(cè)定。

　　1 器材

　　1.1 儀器UNICO2000分光光度計(jì)(上海尤尼柯公司); Heidolph旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(德國(guó)海道夫公司);分析天平(瑞士METTLER TOLEDO公司);打粉機(jī)(天津泰斯特儀器有限公司);回流提取器(天津市泰斯特儀器有限公司)。

　　1.2 材料蘆丁對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所)，鎂粉，鹽酸，硝酸鋁，亞硝酸鈉，氫氧化鈉及其他試劑均為分析純(北京化學(xué)試劑公司)。

　　1.3 藥材藏黨參，產(chǎn)地為甘肅省岷縣(購(gòu)于蘭州金開(kāi)來(lái)商貿(mào)有限公司);潞黨參產(chǎn)地為山西省陵川縣(購(gòu)于北京藥材公司)。在陰涼處風(fēng)干，粉碎后，過(guò)24目篩，置干燥處備用。

　　2 方法與結(jié)果

　　2.1 樣品的制備精密稱取藏黨參6 g，打成粉，置圓底燒瓶，用80%乙醇回流提取兩次(每次30 min，每次100 ml左右)，定容到200 ml體積。

　　2.2 總黃酮成分的測(cè)定顯色反應(yīng)：取1 ml的溶液，加少許的鎂粉和鹽酸，呈褐黃色，再取1 ml的溶液，加少量的10%NAOH, 呈橙色，加熱之后呈黃色。

　　TLC：以蘆丁為對(duì)照品，各取供試液及對(duì)照液適量點(diǎn)與同一硅膠GF254板上，以醋酸乙酯∶甲醇∶水=15∶2∶1 展開(kāi)，3%AlCl3作為顯色劑。置紫外燈365 nm下觀察熒光，供試液色譜在與對(duì)照液色譜相應(yīng)位置上顯示相同的斑點(diǎn)。由顯色反應(yīng)及TLC試驗(yàn)表明說(shuō)明該藥材含有黃酮類成分。

　　2.3 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備精密稱取120 ℃減壓干燥至恒重的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品11 mg，置于100 ml容量瓶中，加適量的80%的乙醇溶液溶解并定容至刻度，搖勻，得0.11 mg/ml的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

　　2.4 最大吸收波長(zhǎng)的選擇分別量取2.0 ml蘆丁標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液和樣品液置于10 ml容量瓶中，加入3 ml 80%乙醇補(bǔ)齊, 加入5%亞硝酸鈉0.4 ml，搖勻，放置6 min，加入10%硝酸鋁溶液0.4 ml，搖勻，放置6 min，再加入4%氫氧化鈉溶液4 ml，用蒸餾水補(bǔ)齊至10 ml，搖勻，放置15 min后，以相應(yīng)的試劑做空白對(duì)照，用紫外分光光度計(jì)進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，比較標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的掃描曲線，確定以510 nm為最大吸收波長(zhǎng)來(lái)進(jìn)行藏黨參總黃酮含量的測(cè)定。

　　2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液0.0，1.0，2.0，3.0，4.0 ml，置于10 ml容量瓶中，按照如上的方法進(jìn)行顯色，以空白試劑作對(duì)照，在510 nm處測(cè)定吸光度。見(jiàn)表1。表1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品濃度與吸光度關(guān)系(略)

　　2.6 精密度實(shí)驗(yàn)取同一供試品溶液按“2.4”項(xiàng)的方法在波長(zhǎng)510 nm處，以試劑空白為參比，重復(fù)測(cè)定4次，計(jì)算得RSD=3.36% (n=4)，結(jié)果表明儀器的精密度良好。

　　2.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)對(duì)同一供試品溶液，每間隔15 min測(cè)定吸光度，考察其在1 h之內(nèi)的穩(wěn)定性，計(jì)算得RSD=3.14 %。結(jié)果表明樣品的穩(wěn)定性良好。

　　2.8 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取藏黨參藥材粗粉，按上述方法平行制備3份樣液，進(jìn)行含量測(cè)定，計(jì)算得RSD= 0.57%(n=3)。結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)方法的重復(fù)性較好。

　　2.9 加樣回收率實(shí)驗(yàn)分別量取藏黨參的樣品液1 ml，共4份，置于10 ml的容量瓶里。精密的加入0.11 mg/ml的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液0，0.6，0.8，1 ml，再加入80%的乙醇溶液補(bǔ)足至5 ml，照上述方法， 進(jìn)行含量測(cè)定，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程。結(jié)果見(jiàn)表2。表2 加樣回收率實(shí)驗(yàn)(略)

　　回收率(%)=(測(cè)得量-原有量)/加入量×100%

　　2.10 藏黨參中總黃酮含量的測(cè)定精密吸取藏黨參樣品液1ml 4份，按照“2.4”項(xiàng)的方法進(jìn)行含量測(cè)定，利用回歸方程曲線得藏黨參的含量為0.087 5%。

　　3 結(jié)論

　　本實(shí)驗(yàn)采用紫外分光光度法，用80%的乙醇提取藏黨參的總黃酮，加樣回收率為95.13%，經(jīng)測(cè)定，總黃酮的含量為0.087 5%。此方法準(zhǔn)確可靠，結(jié)果穩(wěn)定，重復(fù)性好，可作為該藥材的測(cè)定方法。本研究為進(jìn)一步研究藥理作用提供了實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

　　【參考文獻(xiàn)】

　　1]羅達(dá)尚. 新修晶珠本草[M]. 成都：四川科學(xué)技術(shù)出版社，2004:596.

　　[2]楊永昌. 藏藥志[M]. 西寧：青海人民出版社，1991：13.

　　[3]宋立人. 中華本草(藏藥卷)[M]. 上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1999：361.

　　[4]王麗蕃，鄭娟，徐斯凡. 藏黨參和潞黨參中活性成分含量的對(duì)比研究[J]. 時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2008，12(19)：2928.

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